分光光度計應用案例分析

更新時間：2022-06-28

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本文通過應用紫外可見分光光度計研究動物試驗對裂褶菌發酵胞內多糖的祛痰作用。采用小鼠酚紅祛痰法觀察裂褶菌發酵胞內多糖的祛痰作用。裂褶菌發酵胞內多糖能增加小鼠呼吸道酚紅排泌量。實驗結果證明裂褶菌發酵胞內多糖具有一定的祛痰作用。

關鍵詞

分光光度計；裂褶菌；胞內多糖；發酵；酚紅祛痰法；祛痰效果

裂褶菌又名白參、樹花等，隸屬擔子菌亞門、層菌綱、傘菌目、裂褶菌科、裂褶菌屬，是一種食藥兼用菌^[1]。其分布廣泛，在民間被廣泛用于治療小兒盜汗、婦女白帶增多、神經衰弱、頭昏耳鳴等癥^[2]。裂褶菌多糖是指從裂褶菌子實體、菌絲體以及發酵液中提取出來的水溶性多糖，是裂褶菌中最主要的生物活性物質之一，具有抗腫瘤、抗菌、抗輻射、提高機體免疫力等多種藥理活性。由單一組分的β-（1-3）-D葡聚糖組成，其中每3個葡萄糖分子上連有1個β-（1-6）的分支^[3-5]。經研究表明，裂褶菌發酵多糖具有很好的抗炎作用。因此，推測裂褶菌發酵多糖具有祛痰的潛在功能，本研究進行了驗證性研究。

1、材料與方法

1.1試驗材料

供試菌株：裂褶菌菌種由四川省綿陽市食用菌研究所提供

試驗動物：昆明種小鼠，雌性，體重（20±2）g，6周齡，由長春高新醫學實驗動物中心提供，合格證號為10-5113

儀器：電子天平（梅特勒AL104）、UV-5100型紫外可見分光光度計（上海元析儀器有限公司）

試劑：陽性藥川貝枇杷糖漿，江西三九藥業有限公司，批號100305J；苯酚紅、碳酸氫鈉、氫氧化鈉為國產分析純

1.2試驗方法

1.2.1裂褶菌液體發酵培養

將配制好的綜合培養基分裝入容量為250mL的三角瓶內，每瓶裝液量為100mL，121℃、20min滅菌、冷卻至室溫備用。在超凈工作臺上，每瓶接種直徑為6mm的菌餅5～7片。接種后靜置培養12h后置于26℃、120r/min搖床上培養7d^[6]，然后轉入裝有400mL綜合培養基的1000mL三角瓶中，置于26℃、120r/min搖床上培養7d，發酵結束后，抽濾分離菌絲體及發酵液，菌絲體60℃烘干至恒重，備用。

1.2.2 裂褶菌胞內多糖的提取與純化

收集的菌絲體按液料比1∶5在室溫條件下用蒸餾水超聲提取1次，每次30min，超聲頻率70Hz，然后置于80℃的恒溫水浴鍋中浸提5次，浸提的時間分別為5、4、3、2、1h。合并水提液，加入0.5%的活性炭吸附20min，過濾脫碳，減壓濃縮，用3倍體積的95%乙醇進行沉淀，于4℃冰箱中靜置過夜。將獲得的白色纖維狀沉淀，復溶，用3倍體積的95%乙醇再沉淀，重復3次，收集沉淀，再用無水乙醇洗滌3次，直至析出液中無還原糖反應為止。于60℃條件下烘干，得裂褶菌胞內多糖^[7]。

1.3模型與數據分析

1.3.1祛痰動物模型的建立

取昆明種小鼠50只，隨機分為5組，即空白對照組、陽性藥對照組（20mL/kg）、裂褶菌發酵胞內多糖高劑量（500 mg/kg）、裂褶菌發酵胞內多糖中劑量（250 mg/kg）、裂褶菌發酵胞內多糖低劑量（125 mg/kg），每組10只。各組小鼠按體重灌胃給藥（20mL/kg），每天1次，連續給藥5d，其中空白對照組給等體積生理鹽水。試驗前各組小鼠禁食16h。末次給藥后1h后，由腹腔注射5%酚紅溶液0.2mL/10g，注射后30min脫頸椎處死小鼠，仰位固定于手術板上，剪開頸正中皮膚，分離氣管周圍組織，剪下自甲狀軟骨下至氣管分支處的一段氣管。放入盛有3mL生理鹽水的試管中，再加入5%碳酸氫鈉溶液0.1 mL，使氣管段中的酚紅*釋放，用UV-5100型紫外可見分光光度計測波長在546nm范圍內的OD值，用酚紅繪制標準曲線，根據曲線計算酚紅含量^[8-10]。

1.3.2統計學處理。

運用SPSS12.0軟件進行統計學處理，分析組間差異，試驗結果用（x±s）表示。

2、結果與分析

裂褶菌發酵胞內多糖對小鼠呼吸道酚紅排泌量的影響試驗結果顯示，裂褶菌發酵胞內多糖高劑量組、川貝枇杷糖漿組均能增加小鼠呼吸道酚紅排泌量，與空白對照組相比較，有統計學差異（P<0.05）。表明裂褶菌發酵胞內多糖具有祛痰作用（表1）。

表1 裂褶菌發酵胞內多糖對各組小鼠呼吸道酚紅排泌量的影響

組別	小鼠數（只）	劑量	酚紅濃度（µg/ml）
空白對照	10	-	1.01±0.33
陽性藥對照	10	20	1.51±0.51
高劑量	10	500	1.54±0.62
中劑量	10	250	1.36±0.55
低劑量	10	125	1.11±0.52

3、結論與討論

祛痰的作用原理大多為增加呼吸道分泌，使痰液變稀，或降低痰液中的黏性成分，使痰液黏度下降，或增加呼吸道黏膜上皮細胞纖毛的運動，使痰液易于咳出。酚紅祛痰試驗是利用酚紅部分地從呼吸道排泄的特點，在化痰藥的作用下，隨著支氣管分泌的增加，由呼吸道黏膜排出的酚紅也增多，用分光光度計測出酚紅的排泌量，從而得知藥物化痰作用的強弱^[11]。本試驗利用酚紅作為祛痰效果指示劑，在川貝枇杷糖漿及裂褶菌發酵胞內多糖的作用下，使呼吸道黏膜排出的酚紅增加，從而證實支氣管分泌液增加。本試驗研究結果顯示，裂褶菌發酵胞內多糖高劑量組能增加小鼠呼吸道酚紅排泌量，使小鼠呼吸道分泌液明顯增加，與空白對照組相比較，有統計學差異（P＜0.05）。表明裂褶菌發酵胞內多糖具有祛痰作用。本試驗證明了裂褶菌發酵胞內多糖的祛痰藥理作用，為臨床合理開發應用裂褶菌多糖提供了藥理學依據，例如祛痰糖漿。同時，為進一步地研究裂褶菌發酵多糖提供了一定的科學依據。

4、參考文獻

[1] 卯曉嵐.中國經濟真菌[M].北京：科學出版社，1998：48

[2] 黃年來，楊慶堯，張甫安，等.中國食用菌百科[M].北京：中國農業出版社，1997：119.

[3] 趙琪，袁理春，李學春.裂褶菌研究進展[J].食用菌學報，2004，11（1）：59-63.

[4] 鄧百萬，陳文強，李志洲.裂褶菌營養菌絲蛋白質成分的分析[J].氨基酸和生物資源，2003，25（4）：1-2.

[5] 冀頤之，遲文鶴，杜連祥.裂褶菌胞外多糖發酵條件的研究[J].藥物生物技術，2003，10（1）：17-21.

[6] 王振河，萬學東，武忠偉，等.正交設計優化裂褶菌發酵全液多糖提取工藝[J].中國野生植物資源，2007，26（4）：50-56.

[7] 李雪.裂褶菌液體發酵條件及發酵產物的藥理活性研究[D].長春：吉林農業大學，2008.

[8] 李儀奎.中藥藥理實驗方法學[M].2版.上海：上?？茖W技術出版社，2006：428.

[9] 安然，梁茂新.白術鎮咳祛痰、鎮痛和止血潛在作用的實驗研究[J].中醫雜志，2010，51（12）：1125-1127.

[10] 李顯華，宋達夫，甘雨，等.固本清肺貼膏對小鼠止咳、祛痰作用的實驗研究[J].實驗動物研究，2010，27（4）：40-41.

[11] 魏東，姚斌，高興亮，等.少年紅礬杏平喘糖漿鎮咳、祛痰和平喘作用的實驗研究[J].微循環學雜志，2009，19（2）：29-32.

文章內容來源于：劉偉峰，于浩然，王琦.裂褶菌液體發酵胞內多糖祛痰作用的試驗研究[J].現代農業科技，2011,9.